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文章背景簡(jiǎn)介

BACKGROUND INTRODUCTION

由于霉菌毒素污染的普遍性和嚴(yán)重后果，開發(fā)沒有昂貴儀器和專門技術(shù)人員的廉價(jià)檢測(cè)平臺(tái)來進(jìn)行高通量霉菌毒素分析，具有十分重要的意義。由于酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）具有簡(jiǎn)單、成本低、效率高等優(yōu)點(diǎn)，且可以肉眼觀察讀出信號(hào)，是一種很有前途的方法。但傳統(tǒng)ELISA靈敏度較低，并不適用于在資源受限的區(qū)域進(jìn)行肉眼現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。

金納米粒子（AuNPs）具有高消光系數(shù)、獨(dú)特的局域表面等離子體共振（LSPR）特性，產(chǎn)生的比色信號(hào)比傳統(tǒng)的ELISA方法靈敏得多。聚合誘導(dǎo)的AuNPs LSPR變化總是導(dǎo)致明顯的顏色對(duì)比變化，其范圍可從紅色到藍(lán)色，極易被肉眼識(shí)別。此外，比對(duì)傳統(tǒng)ELISA，等離子體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（pELISA）具有高通量、高靈敏度等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)引起了人們的廣泛關(guān)注。但是在pELISA平臺(tái)的開發(fā)中，利用酶催化來觸發(fā)AuNP聚合仍然是一個(gè)挑戰(zhàn)。目前僅有堿性磷酸酶、乙酰膽堿酯酶、葡萄糖氧化酶等幾種酶在免疫檢測(cè)平臺(tái)中被成功用于引發(fā)AuNP聚集。其中過氧化氫（H2O2）是多種酶催化的通用底物或產(chǎn)物，因此H2O2誘導(dǎo)的AuNP聚合具有多用途。

2018年8月，南昌大學(xué)XiruiChen等人在《Talanta》（IF＝ 4．916，化學(xué)2區(qū)）上發(fā)表了題為“A colorimetric immunoassay based on glucose oxidase－induced AuNP aggregation for the detection of fumonisin B1”的論文。提出了一種新的pELISA來檢測(cè)伏馬菌素B1 （FB1）的方法，通過結(jié)合酪胺的h2o2介導(dǎo)的苯酚聚合以及AuNP與酪胺之間的強(qiáng)靜電相互作用，可以誘導(dǎo)AuNP的聚集，從而可以進(jìn)行肉眼觀察。

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所用到的主要方法

METHODS

（1）紫外－可見分光光度法

（2）透射電子顯微鏡

（3）等離子體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

（4）高效液相色譜－熒光檢測(cè)

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文章主要內(nèi)容摘要

ABSTRACT

在資源有限地區(qū)進(jìn)行高通量篩選檢測(cè)和現(xiàn)場(chǎng)診斷時(shí)，裸眼比色法檢測(cè)具有廣闊的應(yīng)用前景。本文開發(fā)了一種新的直接競(jìng)爭(zhēng)的等離子體酶聯(lián)免疫吸附法（dc－pELISA）用于檢測(cè)伏伏菌素B1（FB1），該方法基于金納米顆粒（AuNP）聚合，具有高靈敏度和強(qiáng)的裸眼讀出信號(hào)。通過辣根過氧化物酶（HRP）／過氧化氫（H2O2）／酪胺（TYR）體系誘導(dǎo)AuNP聚合，導(dǎo)致了從紅色到藍(lán)色的明顯變化。在該體系中，通過葡萄糖氧化酶（GOX）介導(dǎo)的葡萄糖氧化反應(yīng)產(chǎn)生H2O2，使用FB1－GOX作為競(jìng)爭(zhēng)性抗原。所建立的pELISA對(duì)fb1在3．125 ng／mL 到25 ng／mL 之間有很好的線性檢測(cè)，顏色由深藍(lán)變?yōu)榧t色，肉眼觀察的截止限為12．5 ng／mL。添加fb1的玉米樣品平均回收率為76．5％ ～ 96．8％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4．88～ 16．4％。同時(shí)，該方法與傳統(tǒng)的ELISA方法在盲檢方面有很好的一致性（R2＝ 0．927）。此外，該方法對(duì)fb1玉米樣品的測(cè)定結(jié)果與超高效液相色譜法的測(cè)定結(jié)果也有很高的一致性。這些結(jié)果表明：本文提出的比色法ELISA在定量檢測(cè)玉米樣品中的FB1時(shí)，具有很好的準(zhǔn)確度和精密度。