前言

目前，腫瘤免疫治療方興未艾，群雄并起，其中最有效的治療策略之一就是過(guò)繼細(xì)胞轉(zhuǎn)移療法（ACT）。嵌合抗原受體（CAR）和工程化T細(xì)胞受體（TCR）是近年來(lái)主要的過(guò)繼性T細(xì)胞免疫療法。TCR工程T細(xì)胞表達(dá)腫瘤抗原特異性受體，其α鏈和β鏈由高質(zhì)量、高親和力的抗原特異性T細(xì)胞克隆產(chǎn)生。

TCR分子屬于免疫球蛋白的一個(gè)超家族，由兩個(gè)共價(jià)結(jié)合的多態(tài)性亞單位組成，每個(gè)亞單位都是抗原特異性的，它們至少與四種不同類型的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)鏈有關(guān)。為了激活T細(xì)胞，TCR和主要組織相容性復(fù)合體（MHC）之間必須存在相互作用。

TCRs與pMHC（peptide－MHC）相互作用的強(qiáng)弱決定了未成熟胸腺細(xì)胞的命運(yùn)，對(duì)幼稚T細(xì)胞的存活至關(guān)重要。因此，TCR－T免疫治療技術(shù)通過(guò)與MHC特別是Ⅱ類分子的有效相互作用激活宿主的免疫系統(tǒng)，后者被TCR－T細(xì)胞和CAR－T細(xì)胞特異識(shí)別。TCR－T細(xì)胞可以識(shí)別細(xì)胞內(nèi)的腫瘤特異性抗原，而CAR－T細(xì)胞主要識(shí)別腫瘤表面的特異性抗原。這使得TCR－T細(xì)胞在腫瘤治療中更有效。

CAR－T與TCR－T的比較

在ACT療法中、TCR－T和CAR－T細(xì)胞都已被成功地用于實(shí)體瘤的臨床治療。

CAR包含腫瘤抗原靶向的單鏈抗體、跨膜結(jié)構(gòu)域和CD3ζ的胞內(nèi)激活結(jié)構(gòu)域。通過(guò)這種方式，工程化的CAR能夠識(shí)別特定的腫瘤相關(guān)抗原，CAR能夠在不經(jīng)過(guò)MHC處理的情況下結(jié)合未經(jīng)處理的腫瘤表面抗原。

第一代CAR－T細(xì)胞表現(xiàn)出有限的擴(kuò)增和相對(duì)較短的持久性， “第二代”CAR－T加入了共刺激受體CD28、4－1BB／CD137和OX40。將這些共刺激受體添加到CAR－T細(xì)胞的CD3ζ結(jié)構(gòu)域中，從而促進(jìn)更強(qiáng)大和持久的T細(xì)胞反應(yīng)。第三代CARs同時(shí)結(jié)合兩個(gè)共刺激信號(hào)（CD28和4－1BB），這比第二代CARs具有更好的擴(kuò)增和更長(zhǎng)的持續(xù)性。

相反，TCR是與MHC抗原復(fù)合物結(jié)合的α／β異二聚體。與TCR相比，CARs識(shí)別腫瘤抗原具有某些缺點(diǎn)，如腫瘤外毒性。與CARs相比，TCRs在基于T細(xì)胞的治療中具有一些結(jié)構(gòu)性優(yōu)勢(shì)，例如其受體結(jié)構(gòu)中有更多的亞單位（10：1），免疫受體基于酪氨酸的激活基序（ITAMs）更多（10：3），對(duì)抗原的依賴性更�。�1：100），以及更多的共刺激受體（CD3，CD4，CD28等等）。具有低MHC親和力范圍（104－106M－1）的TCR就可以有效的激活T細(xì)胞，相反，CARs需要更高的親和力范圍（106－109M－1）。

因此，CAR介導(dǎo)的細(xì)胞毒性依賴于更高密度的細(xì)胞表面抗原。此外，T細(xì)胞／抗原相互作用在免疫突觸（IS）結(jié)構(gòu)中啟動(dòng)，其中TCR呈現(xiàn)具有外周LFA－1粘附的環(huán)狀區(qū)域，而CAR呈現(xiàn)無(wú)環(huán)狀區(qū)域的彌散LFA－1分布。因此，TCR－IS比CAR－IS發(fā)出的信令速度慢但持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。同時(shí)，CAR－T細(xì)胞呈現(xiàn)出更快的殺傷功能，并向下一個(gè)腫瘤靶點(diǎn)遷移（連環(huán)殺傷），這與TCR－T細(xì)胞延長(zhǎng)信號(hào)傳導(dǎo)和延長(zhǎng)殺傷時(shí)間形成鮮明對(duì)比。

重組TCRs

TCR是人體最復(fù)雜的受體之一，它包含六種不同的受體亞單位，它們?cè)赥細(xì)胞中具有非常廣泛的功能。腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞（TILs）的TCR的改變顯著影響腫瘤特異性T細(xì)胞。其中TCR的變化有助于T細(xì)胞的增殖，TCR多樣性與抗腫瘤作用相關(guān)。

對(duì)TIL的TCR工程化是腫瘤的最佳治療方法之一。TCR由結(jié)合到肽－MHC配體的α鏈和β鏈、CD3復(fù)合體的信號(hào)亞單位（?、γ和δ）以及CD3ζ同源二聚體組成。除CD3ζ外，所有亞單位均具有細(xì)胞外免疫球蛋白（Ig）結(jié)構(gòu)域�；�于這些結(jié)構(gòu)，利用工程化TCR的新技術(shù)有ImmTAC、TRuCs和TAC等。

免疫動(dòng)員單克隆T細(xì)胞受體（ImmTAC）

ImmTACs是使用工程化、可溶性和親和增強(qiáng)的單克隆TCRs（mTCRs）設(shè)計(jì)的。ImmTACs基本上是融合蛋白，結(jié)合了工程化的TCR靶向系統(tǒng)和單鏈抗體片段（scFv）效應(yīng)器功能。在ImmTACs的構(gòu)建中， TCR能夠識(shí)別來(lái)自人類白細(xì)胞抗原（HLA）呈遞的細(xì)胞內(nèi)靶點(diǎn)的肽。

ImmTAC通過(guò)特異性靶向腫瘤細(xì)胞表面的HLA－肽復(fù)合物，并通過(guò)scFv抗體片段與CD3的相互作用促進(jìn)T細(xì)胞介導(dǎo)的效應(yīng)器功能。ImmTAC還以劑量依賴性方式激活CD8＋T細(xì)胞，并能有效地重定向和激活效應(yīng)和記憶CD8＋和CD4＋細(xì)胞。ImmTAC通過(guò)分泌多種細(xì)胞因子表現(xiàn)出多功能反應(yīng)，如TNF－α、IFN－γ、IL－6、MIP1α－β和IFN－γ誘導(dǎo)蛋白10。

此外，選擇合適的靶抗原是ImmTACs的關(guān)鍵，質(zhì)譜技術(shù)和MHC多聚體技術(shù)有助于識(shí)別合適的抗原。值得注意的是，TCR工程化T細(xì)胞也表現(xiàn)出非預(yù)期靶向毒性。總的來(lái)說(shuō)，ImmTACs已被證明能增強(qiáng)TCR－T細(xì)胞的抗腫瘤反應(yīng)，但其安全性有待進(jìn)一步研究。

T細(xì)胞受體融合結(jié)構(gòu)

T細(xì)胞受體融合結(jié)構(gòu)（TRuCs），一種與T細(xì)胞受體亞單位融合的抗體結(jié)合域，設(shè)計(jì)用于有效識(shí)別腫瘤表面抗原。TRuCs由靶向腫瘤相關(guān)抗原的特異性抗體融合到5個(gè)TCR亞基（TCRα、TCRβ、CD3?、CD3γ和CD3δ）的胞外N－末端組成，為工程化T細(xì)胞提供了新的靶向特異性和HLA非依賴性靶細(xì)胞清除能力，可被相應(yīng)的靶細(xì)胞激活。

與第二代CAR－T細(xì)胞相比，該方法顯示出更好的抗腫瘤效果。此外，TRuCs支配TCR復(fù)合體的全部信號(hào)機(jī)制，而CARs僅利用分離的CD3ζ胞內(nèi)段的有限信號(hào)。

T細(xì)胞抗原偶聯(lián)劑（TAC）

T細(xì)胞抗原偶聯(lián)劑是另一個(gè)工程化TCR細(xì)胞，以非MHC依賴性方式誘導(dǎo)更有效的抗腫瘤反應(yīng)并降低毒性。TAC嵌合蛋白通過(guò)與CD3結(jié)構(gòu)域的結(jié)合，從而形成TCR／CD3復(fù)合物并獲得更多的T細(xì)胞應(yīng)答。

TAC受體的活性與CD3結(jié)合域的選擇密切相關(guān)。例如，與UCHT1相比，來(lái)自O(shè)KT3（muromonab－CD3）的單鏈抗體具有較低的細(xì)胞因子產(chǎn)生和細(xì)胞毒性，這可能導(dǎo)致實(shí)質(zhì)上不同的功能結(jié)果。與第二代CARs相比，TAC基因工程化的T細(xì)胞不僅有利于過(guò)繼后在實(shí)體瘤的更大浸潤(rùn)，而且減少了T細(xì)胞在表達(dá)抗原的健康組織中的擴(kuò)增和腫瘤外毒性。

TCR－T的安全性

TCR－T細(xì)胞的ACT顯示出很高的腫瘤殺傷，但在一些臨床研究中也出現(xiàn)了一些嚴(yán)重的不良事件。優(yōu)化工程化T細(xì)胞中的TCR親和力至關(guān)重要，受體親和力能夠決定T細(xì)胞治療的安全性和有效性。就療效而言，親和力TCR相互作用足以激活T細(xì)胞，但需要強(qiáng)親和力來(lái)維持T細(xì)胞的擴(kuò)增。

在I／II期ACT臨床試驗(yàn)中，低親和力工程化T細(xì)胞顯示出更安全的特性，但它們的抗腫瘤反應(yīng)較弱。通過(guò)識(shí)別T細(xì)胞的TCR－pMHC相互作用，可以將工程化T細(xì)胞分為高親和力型和低親和力型。此外，人們也開發(fā)了一些技術(shù)來(lái)提高TCR－T的安全性。

基于工程化T細(xì)胞的安全開關(guān)機(jī)制是一種有吸引力的策略。來(lái)源于單純皰疹病毒Ⅰ型（HSV－TK）的胸苷激酶基因是最常見的自殺基因之一。

盡管HSV－TK在基于細(xì)胞的免疫治療中顯示出安全性，但需要導(dǎo)入磷酸化的核苷類似物。另一個(gè)更安全的誘導(dǎo)T細(xì)胞安全開關(guān)稱為誘導(dǎo)型caspase－9（iC9）。iC9是一種修飾的人FK結(jié)合蛋白，可通過(guò)小分子化合物AP1903激活，這一過(guò)程依賴于線粒體凋亡途徑。

iC9自殺基因的免疫原性較低，引發(fā)針對(duì)轉(zhuǎn)基因細(xì)胞的免疫反應(yīng)降低�；�于iC9的安全開關(guān)已經(jīng)被證明比先前的自殺基因更有潛力用于細(xì)胞治療。

小結(jié)

近年來(lái)，工程化T細(xì)胞在治療血液瘤方面顯示出極為優(yōu)越的療效。TCR調(diào)節(jié)對(duì)于T細(xì)胞的再活化、免疫應(yīng)答及其對(duì)外來(lái)抗原的臨床效應(yīng)至關(guān)重要。而TCR－T細(xì)胞具有CAR－T無(wú)法比擬的優(yōu)勢(shì)，在臨床前和臨床研究中顯示出巨大的潛力。未來(lái)，TCR－T必將展現(xiàn)出其獨(dú)有的魅力，給腫瘤患者解除病痛帶來(lái)希望。

參考文獻(xiàn)：

1．Engineered TCR－T CellImmunotherapy in Anticancer Precision Medicine： Pros and Cons． Front Immunol． 2021；12： 658753．