在腫瘤免疫治療中，免疫系統(tǒng)主要誘導(dǎo)細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞的細(xì)胞溶解作用來(lái)抑制疾病的進(jìn)展。然而，腫瘤微環(huán)境中的CD8＋T細(xì)胞往往因?yàn)槌掷m(xù)的抗原刺激，發(fā)生耗竭。耗竭的CD8＋T細(xì)胞持續(xù)存在，但逐漸失去其效應(yīng)器功能、細(xì)胞毒性和增殖能力，導(dǎo)致免疫監(jiān)視功能低下。

耗盡的CD8 T細(xì)胞通常表達(dá)一整套抑制性免疫檢查點(diǎn)受體（ICR），由同源配體觸發(fā)，通過(guò)下游信號(hào)通路調(diào)節(jié)T細(xì)胞反應(yīng)。在耗竭的CD8＋T細(xì)胞中，阻斷ICR和免疫檢查點(diǎn)配體（ICL）之間的相互作用是恢復(fù)CD8＋T細(xì)胞的可行策略�？紤]到腫瘤微環(huán)境中T細(xì)胞與其他免疫細(xì)胞之間的廣泛相互作用，免疫細(xì)胞上的免疫檢查點(diǎn)配體表達(dá)在促進(jìn)抗腫瘤免疫應(yīng)答方面與腫瘤細(xì)胞上的ICL表達(dá)同樣重要。因此，有必要深入了解這些ICL，以及哪些因素導(dǎo)致ICL表達(dá)的患者間差異。

PD－1的配體

PD－1介導(dǎo)的T細(xì)胞抑制可歸因于PD－1的兩種眾所周知的配體，即PD－L1和PD－L2（B7－DC、CD273）。

PD－L1

相比PD－L2，PD－L1是PD－1更主要的配體。腫瘤細(xì)胞的PD－L1表達(dá)通常發(fā)生在惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程中，然而，除了導(dǎo)致PD－L1在腫瘤細(xì)胞中組成性表達(dá)的內(nèi)在因素外，腫瘤微環(huán)境中的外在因素也可促進(jìn)PD－L1的表達(dá)，如營(yíng)養(yǎng)缺乏、代謝物積累和缺氧。

炎癥性腫瘤微環(huán)境提供了調(diào)節(jié)PD－L1表達(dá)的各種因子。IFN－γ主要由效應(yīng)T細(xì)胞和NK細(xì)胞分泌，是各種腫瘤細(xì)胞PD－L1最有效的誘導(dǎo)劑。在機(jī)制上，IFN－γ誘導(dǎo)的PD－L1上調(diào)是通過(guò)JAK1／2–STAT1激活介導(dǎo)的，最終由干擾素調(diào)節(jié)因子1（IRF1）與PD－L1啟動(dòng)子直接結(jié)合。除干擾素外，其他炎癥介質(zhì)也調(diào)節(jié)PD－L1的表達(dá)，如TNF－α、IL－6、IL－27、TGFβ等。

腫瘤浸潤(rùn)性免疫細(xì)胞表達(dá)的PD－L1通過(guò)多種機(jī)制促進(jìn)免疫逃逸。在抗原呈遞細(xì)胞（APC）上表達(dá)的PD－L1，包括樹突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，與表達(dá)PD－1的T細(xì)胞或共刺激分子CD80順式相互作用傳遞抑制信號(hào)。此外，來(lái)自活化T細(xì)胞的PD－L1與其他T細(xì)胞或巨噬細(xì)胞上表達(dá)的PD－1結(jié)合，后者促進(jìn)M2極化。T細(xì)胞上表達(dá)的PD－L1本身作為受體，可導(dǎo)致活化T細(xì)胞的無(wú)能狀態(tài)或凋亡。

PD－L2

作為PD－1的第二配體，PD－L2也賦予PD－1抑制功能，盡管其機(jī)制尚不完全清楚。PD－L2以比PD－L1更高的親和力與PD－1結(jié)合，PD－L2的表達(dá)最初被認(rèn)為僅限于樹突狀細(xì)胞或巨噬細(xì)胞，但最近的研究表明PD－L2的表達(dá)沒(méi)有以前認(rèn)為的那么受限制，已有報(bào)道表明其表達(dá)在許多人類惡性腫瘤中。

與PD－L1一樣，PD－L2在腫瘤細(xì)胞中通過(guò)IFN－γ誘導(dǎo)上調(diào)，IFN－β通過(guò)促進(jìn)STAT3與PD－L2啟動(dòng)子的相互作用也具有類似的作用。此外據(jù)報(bào)道，Th2型細(xì)胞因子IL－4和IL－13也可誘導(dǎo)食管腺癌中PD－L2的表達(dá)。

在免疫細(xì)胞中，IFN－γ和Th2細(xì)胞因子參與PD－L2的表達(dá)。粒細(xì)胞－巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM－CSF）是巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞中PD－L2的誘導(dǎo)劑。此外，常見的γ鏈細(xì)胞因子，如IL－2、IL－15和IL－21，可在單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞中誘導(dǎo)PD－L2表達(dá)。

TIGIT的配體

TIGIT是一種抑制性受體，主要由NK細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、記憶性T細(xì)胞和耗竭的CD8 ＋T細(xì)胞表達(dá)。人TIGIT可與三種配體結(jié)合，即脊髓灰質(zhì)炎病毒受體（PVR，NECL5，CD155）、PVR相關(guān)2（PVRL2，NECIN2，CD112）和PVR相關(guān)3（PVRL3，NECIN3，CD113），其中PVR對(duì)TIGIT的親和力最高。PVR／TIGIT結(jié)合通過(guò)磷酸化TIGIT胞內(nèi)段的免疫受體酪氨酸基抑制基序（ITIM）或干擾PVR／DNAX相關(guān)分子1（DNAM－1，CD226）結(jié)合抑制T細(xì)胞反應(yīng)。

PVR是一種粘附分子，在許多類型的實(shí)體和血液系統(tǒng)惡性腫瘤中過(guò)度表達(dá)，其過(guò)度表達(dá)與不良預(yù)后相關(guān)。PVR是連接蛋白和連接蛋白樣（Necl）分子家族的成員，并參與各種生理過(guò)程，包括細(xì)胞間粘附、運(yùn)動(dòng)、增殖和分化，其過(guò)度表達(dá)可能以腫瘤細(xì)胞固有的方式產(chǎn)生促腫瘤作用。同時(shí)，致癌的RAS／RAF／MEK／ERK信號(hào)通路通過(guò)激活蛋白－1（AP－1）與小鼠成纖維細(xì)胞中PVR啟動(dòng)子的直接結(jié)合來(lái)上調(diào)PVR的表達(dá)，但尚不清楚RAS／RAF／MEK／ERK信號(hào)是否也增加了人類腫瘤細(xì)胞中PVR的表達(dá)。

然而，就抗腫瘤免疫反應(yīng)而言，PVR過(guò)度表達(dá)是否具有促腫瘤或抗腫瘤作用仍不確定。在調(diào)節(jié)抗腫瘤免疫反應(yīng)時(shí)，PVR可與三種不同的受體結(jié)合——DNAM－1、TIGIT和CD96，根據(jù)其結(jié)合的受體，可能會(huì)產(chǎn)生矛盾的效應(yīng)。許多研究表明PVR是NK細(xì)胞功能的刺激因子，然而，鑒于TIGIT與PVR的結(jié)合親和力高于DNAM－1，且TIGIT在腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞上高度表達(dá)，因此，腫瘤細(xì)胞上的PVR表達(dá)如何影響體內(nèi)效應(yīng)細(xì)胞需要進(jìn)一步研究。

TIM－3的配體

TIM－3是T細(xì)胞耗竭的標(biāo)志，是免疫治療中最常見的靶點(diǎn)之一。Tim－3有四種配體：半乳糖凝集素－9（Gal－9）、磷脂酰絲氨酸（PtdSer）、高遷移率族蛋白盒1（HMGB1）和癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞粘附分子1（CEACAM1）。

其中，Gal－9和CEACAM1通過(guò)從TIM－3分離HLAB相關(guān)轉(zhuǎn)錄物3（BAT3）來(lái)減弱TCR信號(hào)，并最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。此外，TIM－3和CEACAM1之間的細(xì)胞內(nèi)相互作用支持TIM－3的成熟和表面轉(zhuǎn)運(yùn)。因此，T細(xì)胞內(nèi)缺乏CEACAM1會(huì)導(dǎo)致TIM－3在細(xì)胞內(nèi)積聚，并且無(wú)法與配體相互作用，從而使T細(xì)胞從TIM－3介導(dǎo)的抑制中釋放出來(lái)。

另一方面，暴露在凋亡細(xì)胞外小葉上的PtdSer可觸發(fā)CD8＋樹突狀細(xì)胞或巨噬細(xì)胞亞群上表達(dá)的TIM－3并誘導(dǎo)吞噬作用。而HMGB1，一種報(bào)警蛋白，可以釋放到腫瘤微環(huán)境中，與游離DNA形成復(fù)合物，復(fù)合物的形成有助于DNA內(nèi)化到樹突狀細(xì)胞中以激活內(nèi)體TLR。而TIM－3結(jié)合HMGB1可抑制復(fù)合物的形成和隨后的樹突狀細(xì)胞激活。迄今為止，已知TIM－3與PtdSer或HMGB1之間的相互作用間接影響T細(xì)胞功能，但PtdSer或HMGB1是否直接影響表達(dá)TIM－3的T細(xì)胞還有待研究。

LAG－3的配體

迄今已發(fā)現(xiàn)了五種LAG－3配體：MHC II、半乳糖凝集素－3（Gal－3）、肝竇內(nèi)皮細(xì)胞凝集素（LSECtin）、α－突觸核蛋白原纖維（α－syn）和纖維蛋白原樣蛋白1（FGL1）。與其他配體不同，LAG－3結(jié)合α－syn與神經(jīng)系統(tǒng)中病理性α－syn纖維的細(xì)胞間傳遞有關(guān)，與免疫反應(yīng)無(wú)關(guān)。

盡管有報(bào)道稱，LAG－3可以高親和力結(jié)合MHCII，并通過(guò)阻止MHCII和CD4之間的相互作用來(lái)調(diào)節(jié)CD4＋T細(xì)胞，但最近的研究表明，LAG－3與MHCII／肽復(fù)合物（pMHCII）的結(jié)合通過(guò)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制信號(hào)抑制CD4＋T細(xì)胞。

此外，研究還發(fā)現(xiàn)，大量表達(dá)pMHCII的APC通過(guò)LAG－3依賴機(jī)制抑制CD8＋T細(xì)胞的激活。另外，其他配體包括Gal－3、LSECtin和FGL1與LAG－3結(jié)合，都可以對(duì)腫瘤微環(huán)境中的CD8＋T細(xì)胞進(jìn)行負(fù)性調(diào)節(jié)。

腫瘤內(nèi)CD8＋T細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞是Gal－3的主要來(lái)源，但Gal－3也可由多種類型的腫瘤細(xì)胞分泌。LSECtin或FGL1在正常生理?xiàng)l件下在肝臟中表達(dá)，在一些腫瘤細(xì)胞中高度上調(diào)。在腫瘤細(xì)胞中通過(guò)IL－6或IL－10可誘導(dǎo)LSECtin表達(dá)，或通過(guò)IL－4也可以在人類單核細(xì)胞來(lái)源的樹突狀細(xì)胞中誘導(dǎo)LSECtin表達(dá)。此外，L－6還增加人肝癌細(xì)胞中的FGL1的表達(dá)。未來(lái)的研究需要驗(yàn)證這些配體的精確分子機(jī)制以及它們?cè)贚AG－3介導(dǎo)的T細(xì)胞抑制中的作用。

VISTA的配體

對(duì)于VISTA配體的研究長(zhǎng)期處于空白狀態(tài)。然而，目前多個(gè)已發(fā)表的研究都強(qiáng)調(diào)了潛在的VISTA配體。最近，一項(xiàng)研究確定VSIG3（或 IgSF11）為VISTA配體，這種相互作用有助于抑制T細(xì)胞反應(yīng)。由于VSIG3在造血細(xì)胞中的表達(dá)是無(wú)法檢測(cè)到的，這種相互作用在體內(nèi)的生理相關(guān)性仍有待驗(yàn)證。

此外，有研究發(fā)現(xiàn)，VISTA和P－選擇素糖蛋白配體－1（PSGL－1）之間存在pH依賴性相互作用。研究人員強(qiáng)調(diào)了VISTA細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的一個(gè)獨(dú)特特性，它富含組氨酸殘基。組氨酸的側(cè)鏈在酸性pH條件下發(fā)生脫質(zhì)子化，例如在TME中發(fā)現(xiàn)的側(cè)鏈，這種翻譯后修飾允許與 PSGL－1 結(jié)合。鑒于VISTA多聚體（包括 VISTA－Fc）只在酸性條件下與白細(xì)胞結(jié)合，這種翻譯后修飾在決定VISTA配體相互作用中的重要性是不可低估的。

對(duì)這一發(fā)現(xiàn)的熱情有多種原因。首先，PSGL－1和VISTA在調(diào)節(jié)T細(xì)胞活性和腫瘤免疫方面的作用越來(lái)越受到重視。其次，pH 和離子環(huán)境是調(diào)節(jié)免疫受體相互作用的一個(gè)新的和有價(jià)值的概念。這在離子環(huán)境在明顯影響T細(xì)胞免疫命運(yùn)的腫瘤中尤為重要。更重要的是，這項(xiàng)研究提出了一種創(chuàng)新的策略來(lái)構(gòu)建pH選擇性抗體，即配體只針對(duì)pH失調(diào)的部位（如腫瘤）。

小結(jié)

在腫瘤微環(huán)境中，腫瘤細(xì)胞通過(guò)誘導(dǎo)表達(dá)和調(diào)控不同的ICR和ICL，建立了一個(gè)適宜生長(zhǎng)的環(huán)境。隨著腫瘤的發(fā)展，ICRs同時(shí)受到共同因素的誘導(dǎo)，而相應(yīng)ICLs的表達(dá)具有重疊但獨(dú)立的調(diào)控。此外，腫瘤微環(huán)境中存在多種調(diào)節(jié)因子，每種調(diào)節(jié)因子都可能對(duì)ICL表達(dá)產(chǎn)生不同的影響。

由于ICL表達(dá)模式可能指示免疫檢查點(diǎn)途徑的活動(dòng)，個(gè)體間ICL的差異表達(dá)譜可用于預(yù)測(cè)免疫檢查點(diǎn)阻斷的治療反應(yīng)。例如，許多研究表明PD－L1表達(dá)與PD－1阻斷劑的治療反應(yīng)相關(guān)。因此，通過(guò)識(shí)別基于ICL的穩(wěn)健生物標(biāo)記物，有可能實(shí)現(xiàn)更高的應(yīng)答率和精確的免疫治療。

參考文獻(xiàn)：

1．Perspectives on immunecheckpoint ligands： expression， regulation， and clinical implications． BMB Rep． 2021Aug 31； 54（8）： 403–412．