位點(diǎn)特異性AXC新型有效載荷
前言
抗體偶聯(lián)藥物(ADC)在過(guò)去幾年中取得了巨大的發(fā)展勢(shì)頭,十多種ADC藥物被監(jiān)管機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)用于臨床癌癥治療。目前人們著重于開(kāi)發(fā)特定位點(diǎn)的偶聯(lián)方法,通過(guò)引入特異性氨基酸或非天然氨基酸殘基、肽和聚糖,通過(guò)抗體工程實(shí)現(xiàn)選擇性抗體偶聯(lián)。
除了使用合成細(xì)胞毒素外,這些新方法還被應(yīng)用于偶聯(lián)其他有效載荷,如非細(xì)胞毒性化合物、蛋白質(zhì)/肽、聚糖、脂質(zhì)和核酸。非細(xì)胞毒性化合物包括聚乙二醇、抗生素、蛋白質(zhì)降解劑(PROTAC和LYTAC)、免疫調(diào)節(jié)劑、酶抑制劑和蛋白質(zhì)配體。不同的小分子蛋白或多肽已經(jīng)可以通過(guò)非天然氨基酸使用點(diǎn)擊化學(xué)、C-末端工程化甲;拾彼嵋约懊富驘o(wú)酶特異性轉(zhuǎn)肽反應(yīng)偶聯(lián)。這些含有新型有效載荷的位點(diǎn)特異性抗體偶聯(lián)藥物(AXC)正處于概念驗(yàn)證和臨床前開(kāi)發(fā)階段,將可能產(chǎn)生新的治療方法,以解決目前未滿足的醫(yī)療需求。
位點(diǎn)特異性抗體偶聯(lián)
位點(diǎn)特異性抗體偶聯(lián)始于單克隆抗體的工程化或修飾,然后是優(yōu)化的藥物連接子的綴合?贵w通過(guò)IgG的Fab或Fc區(qū)進(jìn)行工程設(shè)計(jì),通過(guò)使用基因工程、代謝標(biāo)記或化學(xué)酶修飾引入不同的結(jié)合位點(diǎn)。
位點(diǎn)特異性抗體偶聯(lián)可以通過(guò)基因工程引入特定的位點(diǎn),例如半胱氨酸(Cys)、谷氨酰胺(Gln)、非天然氨基酸(對(duì)乙酰苯丙氨酸和對(duì)疊氮甲基-L-苯丙氨酸)或短肽標(biāo)簽。通過(guò)Cys的偶聯(lián)相對(duì)簡(jiǎn)單直接,不需要特殊的試劑或酶。THOMABTM是通過(guò)工程化Cys進(jìn)行的位點(diǎn)特異性偶聯(lián),是正在開(kāi)發(fā)的首批位點(diǎn)特異性抗體-藥物偶聯(lián)方法之一。在動(dòng)物模型中,使用這種方法產(chǎn)生的ADC不僅表現(xiàn)出高度均質(zhì)性,而且在體內(nèi)表現(xiàn)出更高的療效和治療指數(shù)。
此外,位點(diǎn)特異性偶聯(lián)也可以通過(guò)使用包括轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶、轉(zhuǎn)肽酶/分選酶、糖基轉(zhuǎn)移酶或內(nèi)糖苷酶在內(nèi)的多種酶的化學(xué)修飾方法來(lái)完成。特異性短肽標(biāo)簽內(nèi)氨基酸的酶修飾產(chǎn)生的抗體偶聯(lián)藥物具有高選擇性和穩(wěn)定性,然而其引入的肽標(biāo)簽的潛在免疫原性目前尚不清楚。目前,通過(guò)工程化Cys、非天然氨基酸和酶聚糖重塑的位點(diǎn)特異性偶聯(lián)已經(jīng)大規(guī)模進(jìn)行,并且產(chǎn)生的多個(gè)抗體偶聯(lián)藥物正在臨床試驗(yàn)中進(jìn)行測(cè)試。
非細(xì)胞毒性化合物有效載荷
目前,有幾種非細(xì)胞毒性化合物用于位點(diǎn)特異性偶聯(lián),如聚乙二醇(PEG)、抗生素、免疫調(diào)節(jié)化合物、蛋白質(zhì)降解劑以及在癌癥中過(guò)表達(dá)的受體和蛋白質(zhì)的配體。
PEG
為了延長(zhǎng)抗體片段的半衰期,20多年前首次描述了Fab通過(guò)鉸鏈Cys殘基的PEG化。由于PEG的附著點(diǎn)遠(yuǎn)離表位結(jié)合區(qū),因此與未修飾的Fab相比,PEG化的Fab的抗原結(jié)合和體外生物活性通常不會(huì)降低。聚乙二醇化也不影響穩(wěn)定性,而抗體片段的半衰期可以顯著增加。聚乙二醇化抗TNF Fab,Certolizumab pegol,已被監(jiān)管機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)用于治療免疫介導(dǎo)的炎癥性疾病患者,而其他聚乙二醇化Fab也正在進(jìn)行臨床前和臨床開(kāi)發(fā)。
抗生素
一種新型抗體-抗生素偶聯(lián)物(AAC)正在開(kāi)發(fā),作為一種潛在的治療方法可有效殺死細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌。使用THIOMATM方法,將一種只有在溶酶體中釋放后才被激活的高效抗生素rifalogue與抗金黃色葡萄菌抗體輕鏈上的V205C位點(diǎn)特異性偶聯(lián)。AAC在體內(nèi)治療菌血癥和消除細(xì)胞內(nèi)金黃色葡萄球菌感染方面優(yōu)于萬(wàn)古霉素。AAC提供了一種針對(duì)細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌感染的獨(dú)特治療方法,目前正在臨床開(kāi)發(fā)中(NCT03162250)。
免疫調(diào)節(jié)化合物
合成的非細(xì)胞毒性酶抑制劑或特異性受體的配體已通過(guò)與抗體位點(diǎn)特異性偶聯(lián),用于免疫調(diào)節(jié)。如磷酸二酯酶4(PDE4)的酶抑制劑,將高效PDE4抑制劑與抗CD11a抗體偶聯(lián),免疫偶聯(lián)藥物迅速內(nèi)化入免疫細(xì)胞,并抑制脂多糖誘導(dǎo)的原代人單核細(xì)胞分泌TNF-α。其在小鼠模型中顯示出體內(nèi)抗炎作用。
此外,基于幾種肝X受體(LXR)激動(dòng)劑誘導(dǎo)膽固醇反向轉(zhuǎn)運(yùn)和抗炎的能力,將LXR激動(dòng)劑與抗CD11a抗體偶聯(lián),單核細(xì)胞CD11a表達(dá)的增加已被發(fā)現(xiàn)與動(dòng)脈粥樣硬化性冠狀動(dòng)脈狹窄相關(guān)。該偶聯(lián)藥物具有對(duì)溶酶體組織蛋白酶B敏感的可裂解接頭,免疫偶聯(lián)物在體外特異性誘導(dǎo)人THP-1單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中的LXR激活,而在肝細(xì)胞中沒(méi)有顯著作用。
蛋白降解劑有效載荷
近年來(lái),位點(diǎn)特異性抗體偶聯(lián)被應(yīng)用于蛋白質(zhì)降解領(lǐng)域。蛋白水解靶向嵌合體(PROTAC)依賴于合成的嵌合分子通過(guò)蛋白酶體在細(xì)胞內(nèi)降解蛋白質(zhì)靶標(biāo)。PROTAC在藥物發(fā)現(xiàn)中的應(yīng)用在過(guò)去十年中取得了重大進(jìn)展,然而,依然存在一些挑戰(zhàn),如溶解度和體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)。使用PROTAC位點(diǎn)特異性抗體偶聯(lián),可能會(huì)提供一些更優(yōu)的替代方法。
例如,一些PROTAC化合物已被鑒定用于降解含溴結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)-4(BRD4),然而在小鼠靜脈或口服給藥后,表現(xiàn)出不利的理化特性和較差的體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)。因此,通過(guò)甲硫磺;鵆ys偶聯(lián),將這些PROTAC偶聯(lián)到抗C型凝集素樣分子-1(CLL1)的抗體上,該抗體經(jīng)工程化改造具有三個(gè)不成對(duì)的半胱氨酸殘基(LC-K149C、HC-L174C和HC-Y373C),每個(gè)抗體可能連接六個(gè)PROTAC(DAR為~6)。在攜帶HL-60(急性髓細(xì)胞白血。┘(xì)胞異種移植物的小鼠中,單次靜脈注射抗體-PROTAC偶聯(lián)藥物可產(chǎn)生劑量依賴性的腫瘤生長(zhǎng)抑制。此外除了PROTAC,位點(diǎn)特異性偶聯(lián)也被應(yīng)用于溶酶體靶向嵌合體(LYTAC)。
蛋白質(zhì)和多肽的有效載荷
目前,蛋白質(zhì)或多肽也已被用于位點(diǎn)特異性抗體偶聯(lián)。例如,一種新的抗體-唾液酸酶偶聯(lián)藥物,在抗HER2抗體重鏈的C末端附近引入短肽標(biāo)簽LCTPSR通過(guò)酶反應(yīng)生成疊氮化物,然后通過(guò)點(diǎn)擊化學(xué)將含疊氮化物的抗體偶聯(lián)到唾液酸酶上。抗體唾液酸酶偶聯(lián)藥物對(duì)HER2陽(yáng)性癌癥細(xì)胞的ADCC活性增強(qiáng)。活性增加與癌癥細(xì)胞脫乙;⒆匀粴(xì)胞(NK)與抑制性Siglec受體的結(jié)合減少以及與NKG2D的結(jié)合增強(qiáng)有關(guān)。
此外,也有研究探索抗體與癌癥中過(guò)表達(dá)蛋白質(zhì)的配體位點(diǎn)特異性偶聯(lián)。例如,將抗CD3 Fab或scFv偶聯(lián)到這些配體上以產(chǎn)生雙特異性T細(xì)胞接合器。在一項(xiàng)研究中,一種非天然氨基酸pAcF被摻入抗CD3 Fab的兩個(gè)不同位置(LC-S202和HC-K138),將工程化Fab與前列腺特異性膜抗原(PSMA)的合成高親和力配體偶聯(lián)。該雙特異性T細(xì)胞接合器在體外對(duì)前列腺癌癥細(xì)胞株表現(xiàn)出強(qiáng)大的細(xì)胞毒性,在體內(nèi)也表現(xiàn)出良好的抗癌效果。
AMG133是抗GIPR抗體與GLP-1多肽的偶聯(lián)藥物,AMG133分子中抗體偶聯(lián)的GLP-1多肽分子經(jīng)過(guò)改造,在多肽的第8位和第22位引入非天然氨基酸Aib,增加了多肽部分的血漿穩(wěn)定性和半衰期?贵w分子的重鏈引入了E384C位點(diǎn)突變,通過(guò)cys的巰基將多肽偶聯(lián)至抗體重鏈Fc區(qū)域。其在肥胖患者的1期臨床試驗(yàn)中顯示出卓越的減重藥效。
核酸有效載荷
siRNA是一種21-25核苷酸的雙鏈復(fù)合物,在誘導(dǎo)特定mRNA的降解和抑制其翻譯方面具有高度選擇性。為了增強(qiáng)特異性組織或細(xì)胞遞送,已經(jīng)做出了許多努力來(lái)開(kāi)發(fā)位點(diǎn)特異性偶聯(lián)方法,以產(chǎn)生抗體-siRNA偶聯(lián)藥物(ARC)。
Song等人首先研究了使用非共價(jià)復(fù)合物遞送siRNA的方法。使用重組方法將來(lái)自抗gp160(HIV包膜)Fab片段的重鏈的C末端與魚(yú)精蛋白融合,魚(yú)精蛋白含有許多與DNA相互作用的帶正電荷的氨基酸殘基。然后將來(lái)自Fab-魚(yú)精蛋白融合物與siRNA雜交,siRNA可以被遞送并沉默HIV-1包膜細(xì)胞中的基因表達(dá),并抑制HIV在T細(xì)胞中的復(fù)制。與魚(yú)精蛋白融合的HER2單鏈抗體也能將siRNA特異性地傳遞到HER2陽(yáng)性的乳腺癌癥細(xì)胞中。
此外,siRNA也可以與抗體中特定位點(diǎn)進(jìn)行直接偶聯(lián)。Cuellar等人首次報(bào)道了使用THIOMBTM方法將抗體與siRNA直接偶聯(lián)。他們選擇了七個(gè)針對(duì)不同內(nèi)化程度靶點(diǎn)的抗體,這些抗體在重鏈(A118C)或輕鏈(V205C)中引入了不成對(duì)的Cys,然后和其他幾個(gè)基因特異性的siRNA偶聯(lián)。在體外測(cè)試的ARC中,在表達(dá)高抗原水平的細(xì)胞中,兩種表現(xiàn)出中度基因沉默(≤50%沉默),一種(抗TENB2-siRNA偶聯(lián)藥物)表現(xiàn)出最高沉默(>50%)。
目前,抗體-寡核苷酸偶聯(lián)藥物已開(kāi)始進(jìn)入臨床。幾家生物技術(shù)公司針對(duì)許多不同的適應(yīng)癥進(jìn)行試驗(yàn),包括罕見(jiàn)病、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病和癌癥。這些位點(diǎn)特異性抗體-寡核苷酸偶聯(lián)藥物為未來(lái)許多未滿足的醫(yī)療需求創(chuàng)造了巨大的機(jī)會(huì)。
小結(jié)
作為下一代方法,位點(diǎn)特異性抗體偶聯(lián)為生產(chǎn)具有改善治療指數(shù)的同質(zhì)ADC提供了巨大的潛力。隨著抗體工程方法的不斷進(jìn)步,許多新方法已經(jīng)被開(kāi)發(fā)出來(lái)。它們已被應(yīng)用于偶聯(lián)許多不同的有效載荷,包括非細(xì)胞毒性化合物、小蛋白/肽和siRNA,而不僅僅是ADC的合成細(xì)胞毒素。這些獨(dú)特的抗體偶聯(lián)物擁有巨大的潛力開(kāi)發(fā)針對(duì)不同疾病的新療法,造;颊摺
參考文獻(xiàn):
1.Site-Specific Antibody Conjugation with Payloads beyond Cytotoxins. Molecules. 2023 Jan 17;28(3):917
原文標(biāo)題 : 位點(diǎn)特異性AXC新型有效載荷
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