前言 

抗體偶聯(lián)藥物（ADCs）是一種通過一個合理構(gòu)建的連接子將細(xì)胞毒性小分子藥物偶聯(lián)到單克隆抗體上的復(fù)合物，可以向腫瘤內(nèi)選擇性地輸送有效的細(xì)胞毒性藥物。經(jīng)過幾十年的深入研究和開發(fā)，該領(lǐng)域取得了重大進(jìn)展，自2000年美國食品和藥物管理局（FDA）批準(zhǔn)第一個ADC藥物Mylotarg治療CD33+急性髓系白血�。ˋML）以來，全球共有14個ADC獲得批準(zhǔn)。

值得注意的是，在2020年第四季度，有三項重磅交易涉及針對同一抗原ROR1的ADC。首先，CStone Pharmaceuticals和LegoChem Biosciences簽訂了ROR1 ADC“LCB71（CS5001）”的全球許可協(xié)議。然后默克收購了VelosBio及其ROR1 ADC“VLS-101”，勃林格殷格翰分別以27.5億美元和14.5億美元（合并預(yù)付款和里程碑付款）收購了NBE Therapeutics及其ROR1 iADC“NBE-002”，這些收購?fù)伙@了ROR1在腫瘤學(xué)中的重要性及其作為ADC靶點的良好前景。

ROR1的結(jié)構(gòu)和表達(dá) 

ROR1是一種跨膜受體，包含細(xì)胞外部分、跨膜區(qū)和細(xì)胞內(nèi)區(qū)域。細(xì)胞外部分包括免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域（IG）、富含半胱氨酸結(jié)構(gòu)域（CRD）和Kringle結(jié)構(gòu)域（KD）。CRD通過與配體Wnt5a結(jié)合來調(diào)節(jié)非經(jīng)典WNT信號，KD介導(dǎo)ROR1與其他受體的相互作用，如ROR2。

細(xì)胞內(nèi)部分包括一個酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域、兩個富含絲氨酸/蘇氨酸的結(jié)構(gòu)域和一個富含脯氨酸的結(jié)構(gòu)域。富含脯氨酸的結(jié)構(gòu)域通過招募包含SH3結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)，包括HS1、DOCK2和cortactin，負(fù)責(zé)激活細(xì)胞遷移和增殖信號。富含絲氨酸/蘇氨酸的結(jié)構(gòu)域與銜接蛋白（如14-3-3 zeta）發(fā)生物理相互作用，導(dǎo)致對凋亡的抵抗。

ROR1主要在胚胎發(fā)生過程中表達(dá)，ROR1基因敲除對胚胎是致命的，表明ROR1在胚胎發(fā)生中起著關(guān)鍵作用。ROR1在大多數(shù)成人組織中不表達(dá)，除了一些高表達(dá)ROR1的脂肪組織、內(nèi)分泌腺、胃腸道和未成熟B淋巴細(xì)胞，ROR1在這些成人組織中的功能目前尚不清楚。

 ROR1在惡性腫瘤中的作用 

許多研究表明，ROR1在惡性腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)，其最初被鑒定為血液系統(tǒng)惡性腫瘤中的腫瘤胚胎基因。除了血液系統(tǒng)惡性腫瘤外，ROR1的異常表達(dá)也作為生物標(biāo)記物和治療靶點在多種實體瘤中被發(fā)現(xiàn)。

ROR1在乳腺癌中高表達(dá)，其與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）、腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲性疾病有關(guān)。ROR1在肺癌細(xì)胞中的表達(dá)水平也很高，可作為肺腺癌患者的預(yù)后生物標(biāo)志物。ROR1的沉默導(dǎo)致代表人肺腺癌的細(xì)胞系中的生長抑制。此外，還有關(guān)于ROR1在其他類型癌癥中表達(dá)的報道，包括卵巢癌、結(jié)直腸癌、子宮內(nèi)膜癌、胃癌、黑色素瘤和胰腺癌。

ROR1不僅在惡性細(xì)胞中異常表達(dá)，還參與對細(xì)胞增殖、存活和遷移重要的信號蛋白的激活。在CLL中，Wnt5a/ROR1通過ARHGEF家族銜接蛋白激活Rho GTPase RhoA和Rac1，Wnt5a還誘導(dǎo)HS1的酪氨酸磷酸化，導(dǎo)致ROR1依賴的細(xì)胞遷移。此外，Wnt5a/ROR1誘導(dǎo)NF-κB信號通路的激活，導(dǎo)致促炎癥細(xì)胞因子如IL-6的自分泌調(diào)節(jié)。ROR1的表達(dá)水平與CLL的進(jìn)展密切相關(guān)，使其成為預(yù)后的良好生物標(biāo)志物。在肺癌中，ROR1參與c-Src和MET的激活，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞凋亡的抑制，ROR1還被發(fā)現(xiàn)是cavin-1和caveolin-1的支架蛋白，可激活肺腺癌中的AKT。在乳腺癌中，ROR1促進(jìn)了PI3K/AKT通路的激活，高ROR1表達(dá)與疾病更嚴(yán)重的進(jìn)展相關(guān)。總之，在許多類型的惡性腫瘤中觀察到ROR1的異常表達(dá)和相關(guān)的促生長信號事件，使ROR1成為抗癌藥物開發(fā)的一個有吸引力的治療靶點。

ROR1靶向ADC的研究進(jìn)展

鑒于ROR1在多種癌癥中高表達(dá)，而在普通組織不表達(dá)或低表達(dá)的特性，藥物研發(fā)人員開發(fā)了多種靶向ROR1的抗腫瘤治療策略，其中ADC藥物的進(jìn)展較快，并且表現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景。

NBE-002

目前，大多數(shù)經(jīng)批準(zhǔn)的ADC都是通過賴氨酸或半胱氨酸殘基將有效載荷與單克隆抗體化學(xué)偶聯(lián)而產(chǎn)生的藥物異質(zhì)混合物。相比之下，針對下一代ADC，NBE-002的ROR1是通過人源化抗體（huXBR1-402）與蒽環(huán)類藥物PNU-159682在預(yù)先設(shè)定的藥物抗體比（DAR）下通過sortase a介導(dǎo)的位點特異性轉(zhuǎn)肽反應(yīng)進(jìn)行酶結(jié)合而產(chǎn)生的，產(chǎn)生更純凈、更同質(zhì)的藥物，具有更穩(wěn)定的生物物理和藥代動力學(xué)特征。

SMAC技術(shù)利用Sortase A，一種源自金黃色葡萄球菌的轉(zhuǎn)肽酶，可以催化含有寡甘氨酸的分子連接到具有序列基序的蛋白質(zhì)（LPXTG）。PNU-159682是奈莫霉素的肝臟代謝物，可抑制DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶II，其效力比親本分子高三個數(shù)量級。有趣的是，與其他有效載荷相比，基于蒽環(huán)類的連接子有效載荷通過SMAC技術(shù)的共軛效率更高，DAR在3.7到3.9之間，通過簡單的鏈霉素親和層析步驟可以有效地將DAR增加到4。

除了觀察到NBE-002的直接抗腫瘤活性外，NBE-002能夠增加T細(xì)胞對腫瘤的浸潤，并將“冷”腫瘤轉(zhuǎn)化為“熱”腫瘤，使它們對針對PD-1和CTLA-4的檢查點抑制劑產(chǎn)生反應(yīng)。因此，NBE Therapeutics的ADC被稱為免疫刺激ADC或IADC。為了測試NBE-002的效力，已經(jīng)在不同的臨床前癌癥模型中評估了這種iADC，發(fā)現(xiàn)NBE-002在每個適應(yīng)癥中都顯示出顯著的抗腫瘤活性。NBE-002目前正在進(jìn)行1/2期臨床試驗（NCT04441099），以評估晚期實體瘤，尤其是三陰性乳腺癌患者的安全性和耐受性。

VSL-101

與Adcetris、Polivy和Padcev類似， VLS-101利用蛋白水解可切割的連接子mc vc PAB，將靶向ROR1的單克隆抗體UC-961與微管蛋白聚合抑制劑單甲基auristatin E（MMAE）進(jìn)行偶聯(lián)。UC-961是一種人源化抗體，以高親和力（Kd=2nM）結(jié)合到ROR1的域內(nèi)表位，并通過阻斷Wnt5a與ROR1的結(jié)合，對各種ROR1陽性腫瘤細(xì)胞具有直接細(xì)胞毒活性。

由于UC-961識別獨(dú)特的表位，這種抗體在結(jié)合時會觸發(fā)ROR1的明顯內(nèi)化，有利于向ROR1陽性腫瘤細(xì)胞傳遞細(xì)胞毒性有效載荷。VLS-101在體外模型中被證明能有效誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯和凋亡，并在異種移植物模型中有效阻斷體內(nèi)腫瘤生長。在血液系統(tǒng)惡性腫瘤的一期研究（NCT03833180）中，VLS-101耐受良好，對晚期套細(xì)胞淋巴瘤（MCL）或彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤（DLBCL）患者有效，MCL組的ORR達(dá)47%（7/15），包括3例CR和4例PR；DLBCL組的ORR達(dá)80%（4/5），包括2例CR和2例PR。目前，一項針對實體瘤（包括乳腺癌和肺癌）患者的2期研究（NCT04504916）正在進(jìn)行中。

LCB71（CS5001）

LCB71是另一種抗ROR1 ADC，由LegoChem Biosciences和ABL Bio兩家韓國生物制藥公司共同開發(fā)，基石藥業(yè)獲得了在韓國境外開發(fā)和商業(yè)化LCB71的專有權(quán)。LCB71使用了另一種酶介導(dǎo)的位點特異性偶聯(lián)技術(shù)，這種偶聯(lián)方法利用法尼基轉(zhuǎn)移酶，該酶天然催化CaaX基序中存在的半胱氨酸殘基的異戊二烯基化。

該技術(shù)利用法尼基轉(zhuǎn)移酶的底物混雜性，引入香葉基酮焦磷酸（GKPP）基團(tuán)，用于隨后的烷氧基胺衍生物的化學(xué)選擇性偶聯(lián)。通過偶聯(lián)β-葡萄糖醛酸鍵的吡咯苯二氮卓二聚體（dPBD），利用β-葡萄糖醛酸酶在腫瘤細(xì)胞和腫瘤微環(huán)境中的高表達(dá)，允許選擇性切割和釋放細(xì)胞中的游離PBD，最終導(dǎo)致DNA損傷和細(xì)胞死亡。

LCB71在Jeko-1（人套細(xì)胞淋巴瘤）和MDA-MB-231（人乳腺癌細(xì)胞）異種移植瘤模型中均表現(xiàn)出顯著的抗腫瘤活性，且呈劑量依賴性。LCB71是一款有望在ROR1高表達(dá)的血液腫瘤和惡性實體瘤中都具有精準(zhǔn)治療潛力的候選ADC藥物。

小結(jié)

ROR1在各種實體和血液腫瘤細(xì)胞中廣泛表達(dá)，使其作為AD 藥物開發(fā)的極具吸引力的重要靶點。由于獨(dú)特的位點特異性偶聯(lián)策略，NBE-002和LCB71都是具有給定DAR的同質(zhì)ADC，這有利于生產(chǎn)制造。此外，兩種ADC中的穩(wěn)定連接子也提供了更好的藥代動力學(xué)特征。盡管VLS-101的產(chǎn)品不是同質(zhì)性的，可能存在類似于Adcetris、Polivy和Padcev的穩(wěn)定性問題，但一項1期研究已經(jīng)證明了MCL和DLBCL患者的安全性和臨床療效，是目前處于2期臨床試驗中的最領(lǐng)先的抗ROR1 ADC。無論如何，所有3個抗ROR1 ADC看起來都非常有前景，而最近的3個主要商業(yè)交易可能會促進(jìn)針對ROR1的多種治療方式的快速發(fā)展。

參考文獻(xiàn)：

1.Tyrosine Kinase ROR1 as a Target forAnti-Cancer Therapies. Front Oncol. 2021; 11: 680834.

2. Perspectives on the development ofantibody-drug conjugates targeting ROR1 for hematological and solid cancers. AntibTher. 2021 Oct; 4(4): 222–227.

       原文標(biāo)題 : ROR1靶向ADC的研究進(jìn)展