前言

腫瘤組織中的淋巴細(xì)胞被稱為腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞（TIL），它們?cè)谀[瘤疾病的控制和治療中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。自從1987年首次發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)的TIL能夠比外周血培養(yǎng)的T細(xì)胞更有效地殺死腫瘤細(xì)胞以來，經(jīng)過多年的研究，已經(jīng)證實(shí)培養(yǎng)的TILs能夠成功治愈臨床黑色素瘤患者。

然而，盡管TIL免疫療法已被廣泛接受用于治療黑色素瘤，但其不確定的臨床反應(yīng)意味著TILS在治療實(shí)體瘤中的療效仍受到質(zhì)疑。目前，關(guān)于TIL免疫療法治療實(shí)體腫瘤的療效仍存在兩種相互矛盾的意見。第一個(gè)是，即使TIL作用強(qiáng)大，但在激活后經(jīng)歷1000倍的擴(kuò)增后，一些報(bào)告表明，TIL免疫治療不能可靠地產(chǎn)生治療實(shí)體瘤的有效反應(yīng)。第二個(gè)是，測定TIL對(duì)不同類型腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生可變的結(jié)果。因此，這里提出了關(guān)于實(shí)體瘤中TIL療效的三個(gè)問題，對(duì)于這三個(gè)問題的回答有助于我們更好地制定過繼TIL免疫治療的策略。

為什么TIL在實(shí)體瘤治療中有不同的療效？

在使用TIL治療的首次人體試驗(yàn)中，20名轉(zhuǎn)移性黑色素瘤患者中有11名出現(xiàn)了客觀反應(yīng)，有5個(gè)完全響應(yīng)（CR），在這些早期研究中反應(yīng)的中位持續(xù)時(shí)間為4個(gè)月。根據(jù)2021美國臨床腫瘤學(xué)學(xué)會(huì)（ASCO）年會(huì)上公布的臨床試驗(yàn)結(jié)果，經(jīng)過30多年的研發(fā)，TIL在治療復(fù)發(fā)性/難治性黑色素瘤方面顯示出良好的總體緩解率（38%）。

通過研究早期TIL對(duì)實(shí)體瘤自體腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性機(jī)制，發(fā)現(xiàn)TIL在治療實(shí)體瘤患者中具有不同的療效。這可以歸咎于三方面的原因：TIL沉默、來自異質(zhì)性腫瘤抗原的異質(zhì)性免疫反應(yīng)以及TIL對(duì)實(shí)體腫瘤的穿透。

TIL沉默

在早期的研究中，發(fā)現(xiàn)實(shí)體瘤組織中存在處于靜止?fàn)顟B(tài)的TIL。這些TIL含有活化的T細(xì)胞表面標(biāo)志物，如人類白細(xì)胞抗原-DR同種型（HLA-DR）和IL-2受體，但這些細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞沒有強(qiáng)烈的細(xì)胞毒性。經(jīng)過長時(shí)間的研究，發(fā)現(xiàn)靜止TIL有兩個(gè)主要因素影響療效：內(nèi)部因素和外部因素。

靜止T淋巴細(xì)胞是一組沒有自發(fā)增殖和低代謝率的T細(xì)胞。在使淋巴細(xì)胞沉默的過程中，靜止減少了維持大量淋巴細(xì)胞的資源消耗。在宿主的一生中，只有一小部分天然淋巴細(xì)胞會(huì)被抗原克隆選擇。根據(jù)對(duì)靜止淋巴細(xì)胞的觀察，已經(jīng)提出了產(chǎn)生淋巴細(xì)胞靜止的六種機(jī)制：（1）胸腺陰性選擇，（2）外周克隆缺失，（3）外周誘導(dǎo)的無能，（4）T細(xì)胞忽視，（5）T細(xì)胞抑制，和（6）T細(xì)胞衰老（耗竭）。從實(shí)體瘤獲得的靜止淋巴細(xì)胞是由六種機(jī)制中的一種或多種因素引起的。

除了這些內(nèi)部因素，外部的腫瘤微環(huán)境（TME）可以在TIL培養(yǎng)期間維持TIL靜止并影響TIL細(xì)胞毒性。TME由三個(gè)組成部分組成：（1）稱為細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的組織，包括上皮、基底和內(nèi)皮；（2） 調(diào)節(jié)細(xì)胞，包括腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAM）、腫瘤相關(guān)中性粒細(xì)胞-2（TAN-2）、腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞（CAF）和髓源性抑制細(xì)胞（MDSC）；以及（3）通過釋放細(xì)胞外信號(hào)、促進(jìn)腫瘤血管生成、促進(jìn)和影響腫瘤細(xì)胞生長的信號(hào)分子。所有ECM均產(chǎn)生TGF-β，其阻斷TIL功能，包括抑制TIL生長和細(xì)胞毒性。此外，一些信號(hào)分子可以通過釋放細(xì)胞外信號(hào)通路影響TIL的生長，例如腺苷（ADO）和吲哚2，3-二氧合酶（IDO）。

異質(zhì)性腫瘤抗原的異質(zhì)性免疫反應(yīng)

TIL對(duì)自體腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的反應(yīng)，包括對(duì)同源抗原的自我耐受、異質(zhì)反應(yīng)以及TIL對(duì)自體腫瘤的異質(zhì)性網(wǎng)絡(luò)。

人類腫瘤抗原可以分為兩種主要類型：腫瘤相關(guān)抗原（TAA）和腫瘤特異性抗原（TSA）。TAA包括癌-睪丸（CT）抗原、分化抗原（DA）和癌胚抗原（CEA）。TSA包括新抗原和腫瘤病毒抗原，如HBV、EBV和HPV E6/E7蛋白。CT抗原、分化抗原和癌胚抗原在胚胎發(fā)育階段早期產(chǎn)生，并在成人免疫系統(tǒng)完全發(fā)育時(shí)消失，因此自我耐受可能導(dǎo)致針對(duì)這些抗原的靜止TIL。

由致癌過程中的遺傳不穩(wěn)定性可以產(chǎn)生新抗原，新抗原也可以由病毒感染誘導(dǎo)，例如選擇性剪接和基因重排。有兩種新抗原：共享新抗原和個(gè)性化新抗原。共享新抗原是指在不同癌癥患者中常見且不存在于正�；�因組中的突變抗原，具有高免疫原性篩選潛力，目前用作廣譜治療性癌癥疫苗或過繼免疫治療。個(gè)性化新抗原指的是不同患者的變異抗原。因此，個(gè)性化的新抗原可以針對(duì)每個(gè)患者進(jìn)行特異性靶向治療，可用于設(shè)計(jì)個(gè)性化的免疫治療。

不同類型的新抗原和不同數(shù)量的TAA可存在于不同個(gè)體的同一腫瘤中，從而產(chǎn)生個(gè)體免疫反應(yīng)，因此TIL給藥應(yīng)發(fā)展為免疫治療的個(gè)體化設(shè)計(jì)。基于個(gè)體基因組數(shù)據(jù)等個(gè)性化信息，個(gè)性化TIL治療可以提高抗腫瘤作用的強(qiáng)度和持久性，提高生存率和生活質(zhì)量，并最終改善患者的癌癥治療結(jié)果。

TIL對(duì)腫瘤組織的穿透

TIL細(xì)胞表面的分子完整性對(duì)于實(shí)體腫瘤的過繼TIL免疫治療是非常重要的。研究顯示，使用溫和的酶消化（僅用膠原酶IV消化）從實(shí)體瘤中分離和培養(yǎng)TIL，結(jié)果顯示65%的TIL增殖超過1000倍，治療實(shí)體瘤的臨床試驗(yàn)顯示出更好的治療結(jié)果。

另一方面， TIL進(jìn)入腫瘤組織依賴于特定的運(yùn)動(dòng)能力，如滾動(dòng)、粘附、外滲和趨化性�，F(xiàn)在，CXCR2、CCR4等趨化因子受體或配體已被用于修飾增強(qiáng)T細(xì)胞向腫瘤部位的運(yùn)輸。這些研究表明，未來的聯(lián)合治療可能會(huì)增強(qiáng)過繼轉(zhuǎn)移T細(xì)胞在患者體內(nèi)的療效和歸巢能力。

如何使TIL在實(shí)體瘤治療中具有穩(wěn)定的療效？

清除抑制因素

如前所述，靜止TIL受內(nèi)部和外部因素影響。為了克服這些抑制因素，已經(jīng)研究了一些清除方法，例如在TIL培養(yǎng)期間去除自體腫瘤細(xì)胞，以獲得更好的細(xì)胞毒性增強(qiáng)反應(yīng)。此外，一些可以阻斷內(nèi)部和外部因素的藥物，如PD-1抗體阻斷劑。

增強(qiáng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫反應(yīng)

為了增加對(duì)腫瘤異質(zhì)抗原的免疫反應(yīng)，一些臨床實(shí)驗(yàn)將腫瘤新抗原修飾到T細(xì)胞。另一方面，通過研究TIL與具有不同腫瘤抗原網(wǎng)絡(luò)的反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)了一些實(shí)體瘤TIL細(xì)胞中靜止基因的表達(dá)，如Tob-1、KLF2、TGFB1和ERF，對(duì)這些分子的調(diào)控有助于增強(qiáng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的反應(yīng)。

增加TIL對(duì)腫瘤細(xì)胞的接觸

為了提高TIL與腫瘤細(xì)胞的有效接觸，一方面可以在溫和的消化條件下修改配方，如膠原酶IV，以保持實(shí)體瘤中T細(xì)胞的完整性。另一方面，可以通過將培養(yǎng)的TIL直接注射到患者的腫瘤部位來增加TIL與腫瘤細(xì)胞的接觸。研究表明，在對(duì)68例卵巢癌和其他女性惡性腫瘤患者的分析中，局部注射和靜脈注射TIL先比，局部注射組的抗癌效果高于靜脈注射組。

未來TIL治療的方向在哪兒？

現(xiàn)在，越來越多的T細(xì)胞治療方法已被用于實(shí)體瘤的治療。此外，隨著基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)發(fā)展到臨床免疫治療，越來越多的靶向藥物及其機(jī)制被發(fā)現(xiàn)用于治療腫瘤�，F(xiàn)在正是開發(fā)針對(duì)實(shí)體瘤個(gè)性化TIL療法的好時(shí)機(jī)。

首先，單細(xì)胞技術(shù)已經(jīng)成熟，并鑒定出一些與TIL沉默相關(guān)的基因。其次，在臨床試驗(yàn)中從不同的臨床反應(yīng)中確定了某些基因中的不同SNP。第三，人們已經(jīng)使用人工智能來分析TIL以解決實(shí)體癌的臨床管理�？傊�，在單細(xì)胞技術(shù)和人工智能網(wǎng)絡(luò)的臨床基因組學(xué)應(yīng)用之后，個(gè)性化T細(xì)胞治療呼之欲出。

一種好的免疫療法應(yīng)該具有療效高、副作用少、對(duì)每個(gè)腫瘤患者經(jīng)濟(jì)成本低的特點(diǎn)�；�于這些考慮，未來免疫治療的這些發(fā)展需要在最佳細(xì)胞培養(yǎng)和正確的臨床治療中為每個(gè)患者開發(fā)負(fù)擔(dān)得起的治療、可耐受的副作用和更優(yōu)越的療效。因此，過繼性T細(xì)胞免疫治療的所有努力都應(yīng)集中于在實(shí)驗(yàn)室中建立最佳的T細(xì)胞培養(yǎng)物，在臨床中選擇正確的給藥模式，考慮可負(fù)擔(dān)性，并提高每個(gè)患者的可用性。

參考文獻(xiàn)：

1.Whydo tumor-infiltrating lymphocytes have variable efficacy in the treatment ofsolid tumors? Front Immunol.2022 Oct 21;13:973881

       原文標(biāo)題 : 關(guān)于實(shí)體瘤中TIL療效的幾個(gè)問題